Estandarizaciones de alergenos en España

MODERADOR:
Dr. José M. Olaguibel.
Hospital Virgen del Camino. Pamplona.

REQUISITOS DE LOS EXTRACTOS ALERGÉNICOS PARA SU UTILIDAD CLÍNICA
Dra. Ana I. Tabar.
Hospital Virgen del Camino. Pamplona.

Definición extractos alergénicos
Según la Farmacopea Europea los extractos alergénicos son preparados farmacéuticos que derivan de materiales existentes en la naturaleza, que contienen alergenos (en su mayoría proteínas, pero también glicoproteínas) y que son sustancias que causan y/o provocan enfermedad alérgica.  Estos productos están destinados al diagnóstico y/o tratamiento de las enfermedades alérgicas causadas por estos alergenos.

Composición extractos alergénicos
Los extractos alergénicos son mezclas complejas de biomoléculas, principalmente proteínas y glicoproteínas hidrosolubles, así como carbohidratos, que se obtienen a partir de la materia prima origen.  La composición de los extractos alergénicos depende por un lado de la materia prima o fuente que utilicemos, que va a ser una mezcla muy heterogénea de sustancias no sólo proteicas como luego veremos y por otro lado del proceso de fabricación, que en esencia, con pequeñas modificaciones, es el mismo para cualquier extracto.

Fuentes
En cuanto a la fuente que vamos a utilizar puede ser tan variada como causas de alergia existen.  Sin embargo, las principales causas de alergia son ácaros, pólenes de plantas, hongos, epitelios de animales y alimentos.  Para estos alergenos existe una fabricación industrial de extractos, es decir, están comercializados.  No obstante, existen muchas otras sustancias capaces de producir alergia y en muchas ocasiones debemos fabricar nuestro propio extracto en el laboratorio para el diagnóstico.  Es importante tener en cuenta que la materia prima al ser materia viva puede tener variabilidad en su composición proteica tanto cuantitativa como cualitativa dependiendo de las condiciones de crecimiento de la misma en el caso por ejemplo de ácaros, o de las condiciones climatológicas en el caso de pólenes, etc..  Por este motivo, es fundamental disponer de un extracto alergénico de referencia para cada fuente, bien caracterizado y comparar e igualar a este extracto los sucesivos lotes de fabricación.  En esto consiste la estandarización de extractos alergénicos.

Alimentos
Los alimentos también son causa frecuente de alergia y aunque para la realización de pruebas cutáneas podemos utilizar el alimento en fresco, esto no siempre es posible, sobre todo cuando son frutas o verduras de temporada.  En general, los extractos comerciales de alimentos no tienen gran calidad y no están bien estandarizados a diferencia de los extractos de fuentes que hemos mencionado ya.  Aunque se ha hecho avances importantes en los últimos años sobre el conocimiento de alergenos alimentarios, este conocimiento es menor que para otras fuentes de alergenos y además los extractos alergénicos de alimentos sólo se utilizan en diagnóstico y no en tratamiento, por lo que para la industria el interés comercial es menor.
Además de los mencionados, podemos elaborar extractos de otras muchas fuentes alergénicas.  De hecho, en nuestro laboratorio producimos algunos extractos de forma habitual, como frutas, especias o maderas de árboles.

Proceso elaboración
La fabricación de un extracto incluye una serie de procesos que convierten una fuente biológica natural en un fármaco estéril inyectable.
El proceso general de elaboración de extractos incluye:

En la fabricación industrial de extractos alergénicos, los laboratorios disponen de un extracto de referencia interna, bien caracterizado en su composición y actividad alergénica y cada nuevo lote del extracto de esa materia prima concreta se comparará con el extracto de referencia para garantizar que sea similar.
La caracterización del extracto de referencia incluye el análisis bioquímico de la muestra, su contenido en proteínas y carbohidratos, el análisis proteico mediante técnicas electroforéticas como el SDS - PAGE e IEF, el contenido en alergenos mediante inmunodetección, la valoración de la actividad biológica o potencia in vivo, probando el extracto en pacientes alérgicos y calculando la cantidad de alergenos mayores, como p. Ej. Der p 1 y Der p 2 en el extracto utilizando anticuerpos monoclonales.
Cada nuevo lote de extracto debe caracterizarse de igual manera y se compara su actividad alergénica in vitro con el extracto de referencia.  Todas estas técnicas empleadas se detallarán en futuras clases.
En definitiva, las fuentes de extractos son múltiples, la materia prima es heterogénea y el proceso de fabricación debe garantizar que todas las proteínas alergénicas estén presentes en el extracto final y que la cantidad de estas proteínas sea similar cada vez que fabriquemos un nuevo extracto.
 
Estandarización biológica
Los años 80 marcaron un hito importantísimo para la calidad de los extractos alergénicos, con la aparición de los extractos valorados biológicamente.
 Los extractos así valorados presentan fundamentalmente tres importantes ventajas:
- Poder establecer la potencia del extracto en base al contenido de sus componentes activos o alergenos.
- Asegurar la homogeneidad lote a lote mediante la comparación con un extracto de referencia de actividad biológica conocida.
- Asegurar que extractos alergénicos procedentes de distintas materias primas, pero con igual actividad in vitro, provoquen el mismo tipo de respuesta cutánea en la población alérgica correspondiente.

Percepción del clínico en la actualidad
La aplicación posterior de nuevas tecnologías, como los anticuerpos monoclonales, al estudio de los extractos alergénicos y el gran avance de la biología molecular en estos últimos años y en todos los ámbitos de la alergia, hace que los requisitos de estandarización en el momento actual se hayan quedado desfasados y resulten pobres, existiendo en el mercado productos "buenos" y "malos".
La inexistencia de estándares internacionales implica que los extractos de las diferentes compañías no son comparables, los productos de diagnóstico tampoco lo sean y las vacunas terapéuticas tampoco.

Hacia una estandarización común
En los últimos años han surgido diferentes iniciativas en este sentido como por ejemplo
la Red Temática de Investigación Colaborativa en alergia a alimentos de origen vegetal, proyecto multicéntrico incluido en las redes temáticas de investigación colaborativa (RETICS), financiada con el Fondo de Investigación Sanitaria, que entre otros objetivos incluye el mejorar la calidad de los extractos alergénicos de origen vegetal.
Un segundo proyecto sería el denominado proyecto CREATE, cuyo título completo es el desarrollo y certificación de materiales de referencia para productos alergénicos y la validación de sus métodos para su cuantificación (G 6 RD - CT - 2.001 - 00582), grupo que incluye seis compañías de manufactura de productos alergénicos, dos compañías biotécnicas, tres organismos reguladores, once grupos clínicos y seis laboratorios de investigación.
Con un objetivo bien definido que consiste en la evaluación de los alergenos mayores recombinantes como candidatos a obtener la certificación como materiales de referencia y la validación de técnicas de Elisa para su cuantificación, el proyecto tiene abierto en este momento 7 grupos de trabajo.  Un primer grupo dedicado al estudio del polen de abedul, un segundo grupo dedicado al estudio del polen de gramíneas, un tercer grupo dedicado al estudio del polen de olivo, un cuarto grupo dedicado al estudio de ácaros, un grupo clínico encargado de seleccionar los pacientes y de la evaluación in vivo de los productos candidatos obtenidos de los grupos anteriores de trabajo, un sexto grupo dedicado al estudio de la liofilización, estabilidad y homogeneidad de los tests y un séptimo grupo de trabajo encargado de la explotación de los resultados.

Por lo tanto y a la vista de los nuevos avances inmunológicos y de las investigaciones en curso, el clínico necesita y debe conseguir productos alergénicos de diagnóstico eficaces, es decir, sensibles y específicos y productos alergénicos de tratamiento eficaces y bien tolerados, etiquetados en unidades comprensibles y reproducibles, con ajuste de alergenos relevantes y que tengan tras sí ensayos de eficacia y tolerancia, gran estabilidad y a ser posible registro sanitario.

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