ABSTRACT

INTRODUCCIÓN: Robinia pseudoacacia (Rp) es un árbol de uso ornamental. Hasta el momento actual, la alergia al polen Rp no ha sido estudiada.
OBJETIVOS: Estudiar la prevalencia de sensibilización al polen de Rp en pacientes polínicos, la reactividad cruzada existente entre el polen de Rp y otros pólenes alergénicos y la implicación de panalérgenos (profilina, polcalcina y 1,3-β-glucanasa) como causa de sensibilización al polen de Rp.
MATERIAL Y MÉTODOS: Se realizaron pruebas cutáneas con un extracto de polen de Rp a 149 pacientes polínicos y provocación nasal a 10 pacientes. Se realizaron Immunoblotting, ELISA y estudios de Immunoblotting inhibición con el polen de Rp, otros pólenes alergénicos y alérgenos recombinantes de pólenes.
RESULTADOS: 64 pacientes (43 %) estaban sensibilizados al polen de Rp. Las provocaciones nasales fueron positivas en 5 pacientes sensibilizados a Rp y negativas en 4 controles y en 1 paciente sensibilizado. El perfil alergénico del polen de Rp comprendía, al menos, los panalérgenos profilina, polcalcina y 1,3-β-glucanasa. Los pacientes sensibilizados a Rp presentaban una sensibilización frente a profilina, polcalcina y 1,3-β-glucanasa de un 60%, 33% y 87%, respectivamente. Los ensayos de Immunoblotting inhibición demostraron que todas las bandas fijadoras de IgE en el polen de Rp podían ser inhibidas por extractos de polen de Lolium, Cupressus, Chenopodium, Olea y Rp.
CONCLUSIONES: La elevada prevalencia de sensibilización a polen de Rp encontrada en un grupo de pacientes polínicos es debida a reactividad cruzada con panalérgenos (profilina, polcalcina y 1,3-β-glucanasa) de otros pólenes alergénicos.

INTRODUCCIÓN
R. pseudoacacia (falsa acacia, acacia bastarda o “pan y quesillos”) es un árbol perteneciente a la familia de las leguminosas. Originario de Estados Unidos fue introducida en 1601 en Europa a través de Francia por Jean Robin y de allí pasó a Barcelona y Madrid (1). Al ser un árbol vistoso, poco exigente y que crece con rapidez se le ha dado un uso como árbol ornamental en calles, parques y paseos de Europa (2). En Madrid, según el Censo de Parques y Jardines del Ayuntamiento, representa el 10% del arbolado de alineación, con 22.873 unidades.
Su polen se caracteriza por tener un grano trizonocolporado, isopolar, anguloaperturado, de tamaño mediano (diámetro polar = 27-34 µ, diámetro ecuatorial = 24-30 µm).
Se trata de un polen entomófilo (polinización a través de insectos), con un periodo de polinización de abril a julio. El polen de especies entomófilas también puede aerotransportarse. En el caso de Rp, la morfología de su flor (papilionácea con pétalos que cubren las anteras) sería la mayor restricción para liberación del polen, liberándose únicamente escasos granos directamente a la atmósfera (3).
El polen de Rp fue considerado alergénico por Lewis y Vinay en 1979. Dichos autores estudiaron los pólenes entomófilos de norte América y atribuyeron a este polen alergenicidad moderada con relevancia clínica cuestionable. Además concluyen que la característica de la flor y no la potencial alergenicidad del polen situaba a este género fuera de los miembros más importantes de las leguminosas (3).
Encontramos cifras de prevalencia de sensibilización a polen de Rp de un 49% (103/210) de los pacientes polínicos en el norte de Extremadura (4) y de un 12% de población alérgica del centro de Portugal (adulta 12,1 %, pediátrica 12,9%) (5).
Hasta el momento actual, la alergia al polen de Rp no ha sido estudiada. Se le ha considerado un polen poco importante debido a su baja concentración en el ambiente y su concomitancia con otros pólenes relevantes (gramíneas y olivo).

OBJETIVOS

• Obtener los recuentos de polen de Rp en Madrid

• Estudiar la prevalencia de sensibilización al polen de Rp en un grupo de pacientes polínicos de Madrid.

• Estudiar la relevancia clínica de la sensibilización a Rp mediante provocación nasal.

• Estudiar la existencia de IgE frente a polen de Rp (ELISA; Immunoblotting)

• Estudio de la posible reactividad cruzada con otros pólenes mediante Immunoblotting inhibición.

• Estudio de la sensibilización a panalérgenos (profilina, polcalcina y 1,3-β glucanasa) en un subgrupo de pacientes sensibilizados a polen de Rp.

• Estudio de la existencia de alérgenos homólogos a los anticuerpos policlonales p Ole e2 (profilina), p Ole e 3 (polcalcina)) y anticuerpo monoclonal mOle e 9 (1,3-β-glucanasa) en el polen de Rp.

MATERIAL Y MÉTODOS

• Se solicitaron los recuentos de polen de Rp a la RED PALINOCAM. Dicha red posee 3 captadores de pólenes en la ciudad de Madrid (Madrid-Ciudad Universitaria, Madrid-Barrio de Salamanca, Madrid-Centro).

• Se realizaron pruebas cutáneas a 149 pacientes polínicos que residían en Madrid con extracto de polen de Rp a 5 mg/ml (ALK-Abelló) y con una batería de pólenes estandarizada (ALK-Abelló) que incluía Cupressus arizonica, Lollium, Olea, Salsola, Plantago, Artemisia y Parietaria.

• Se realizó provocación nasal a 10 pacientes (6 pacientes polínicos sensibilizados a Rp y 4 controles polínicos no sensibilizados) con extracto de Rp a 10 mg/ml (ALK-Abelló).

• Se determinaron los niveles de IgE especifica (ELISA) frente a polen de Rp y alérgenos recombinantes de profilina (rChe a 2), polcalcina (rChe a 3) y 1,3-β-glucanasa (rNtD Ole e 9) en un subgrupo de 15 pacientes sensibilizados a Rp.

• Se realizó SDS-PAGE IgE Immunoblotting frente a polen de Rp utilizando suero de 15 pacientes sensibilizados a Rp.

• Se realizó Immunoblotting inhibición de la fijación de IgE frente a polen de Rp usando extractos de pólenes (Lolium, Cupressus, Chenopodium y Olea) y profilina (r Che a 2), así como inhibición inversa.

RESULTADOS
Recuentos de polen:

El polen de Rp se recogía en los captadores entre los meses de abril a julio. Los recuentos anuales totales (1997-2003) de polen de Rp variaban de 2 a 142 granos/m3 en las subestaciones de Madrid Centro y Facultad de Farmacia con una máxima concentración media alcanzada de 33 granos el día 18/04/98 en la subestación de Facultad de Farmacia. No se objetivaba presencia de polen en el captador de Barrio de Salamanca.

Pruebas Cutáneas

El 43 % (64/149) de los pacientes estaban sensibilizados a polen de Rp. No se encontró ningún paciente monosensibilizado.
Los pacientes sensibilizados a polen de Rp presentaban mayor prevalencia de sensibilización frente a otros pólenes que los no sensibilizados: L. perenne (95% vs. 83%, p<0.01), O. europaea (92% vs. 73%, p<0.001), P. acerifolia (88% vs. 42%, p<0.001), C. arizonica (78% vs. 63%, p<0.01), S. kali (83% vs. 36%, p<0.001), P. lanceolata (75% vs. 38%, p<0.001), A. vulgaris (57% vs. 19%, p<0.001) and P. judaica (42% vs. 7%, p<0.001).

Provocaciones nasales

De las 10 provocaciones nasales, 5 resultaron positivas en pacientes sensibilizados a polen de Rp. y 5 negativas, 4 en los controles y 1 en un paciente sensibilizado a Rp.

IgE específica (ELISA)

La determinación de IgE específica frente a polen de Rp y alergenos recombinantes de profilina (r Che a 2), polcalcina (r Che a 3) y 1,3-β-glucanasa (rNtD Ole e 9) fue positiva en un 60%, 60%, 33% y 87% de los pacientes, respectivamente.

SDS-PAGE IgE Immunoblotting con polen de Rp (figura 1).

La mayoría de los pacientes reconocían bandas proteicas de entre 10 y 15 kDa, que por su movilidad electroforética, podrían corresponderse con profilinas o polcacinas y una banda de alto peso molecular, en torno a 32-46 kDa, que podría corresponderse con 1,3-β-glucanasa.

Estudio de la presencia de alergenos homólogos de diferentes fuentes en el polen de Rp.

Se realizó SDS-PAGE con extracto de polen de Rp utilizando como gel separador poliacrilamida al 12,5% y se tiñó con azul de Coomassie para poder visualizar las proteínas (figura 2, A). Además se realizó SDS-PAGE IgG Immunoblotting con extracto de polen de Rp utilizando un antisuero policlonal específico para Ole e 2 (profilina de olivo) y Ole e 3 (polcalcina de olivo) y un anticuerpo monoclonal específico para 1,3-ß-glucanasa (N-terminal de ole e 9) demostrándose la presencia de alergenos homólogos a profilina, polcalcina y 1,3-ß-glucanasa en el polen de Rp. (Fig. 2, B).

Immunoblotting inhibición.

Se realizaron ensayos de Immunoblotting inhibición utilizando extractos de pólenes y profilina usando un pool de 5 pacientes sensibilizados a polen de Rp.
En un primer lugar se realizó la inhibición del extracto de polen de Rp (fase sólida) usando como inhibidores los extractos de pólenes (Lolium, Cupressus, Chenopodium y Olea) y profilina (rChe a 2). Se observó que todos los pólenes estudiados son capaces de inhibir totalmente la fijación de IgE en el extracto de Rp, así como la profilina es capaz de inhibir la fijación de IgE a la banda de profilina de Rp. (figura 3 A)
Por el contrario, cuando se utilizó el extracto de polen de Rp en fase inhibitoria, vemos que únicamente se inhiben las bandas correspondientes a profilina y 1,3-β-glucanasa en el polen de olivo, así como la mayoría de las bandas fijadoras de IgE en el extracto de Chenopodium (polen no predominante en Madrid, cuya sensibilización cutánea es principalmente debida a reactividad cruzada). Sin embargo, no se encontró inhibición de la fijación de IgE en el extracto de Cupressus ni en el de Lolium. (Figura 3 B)

CONCLUSIONES

• Hemos encontrado alta prevalencia de sensibilización cutánea frente a polen de Rp en un grupo de pacientes polínicos a pesar de sus bajas concentraciones en la atmósfera de Madrid.

• La sensibilización a polen de Rp se asocia con sensibilización a otros pólenes alergénicos (L. perenne, O. europaea, P. acerifolia, C arizonica, S. kali, P. lanceolada, A. vulgaris y P. judaica).

• Hemos demostrado que la provocación nasal puede producir síntomas en un grupo de pacientes sensibilizados, aunque no podemos asegurar que produzca síntomas durante la exposición natural al mismo.

• Hemos demostrado mediante Immunoblotting inhibición que la sensibilización a polen de Rp. es debida a reactividad cruzada con otros pólenes.

• Hemos demostrado que el polen de Rp. contiene al menos los panalérgenos profilina, polcalcina y 1,3-β-glucanasa

• La sensibilización a polen de Rp. en Madrid es un marcador de sensibilización a panalérgenos.

• La sensibilización a panalérgenos puede actuar como factor de confusión en el diagnóstico de alergia a polen.

• El uso de pruebas cutáneas con extractos de pólenes nos puede llevar a diagnósticos erróneos.

• El diagnóstico por componentes utilizando alérgenos purificados o recombinantes nos pueden ayudar a identificar el perfil de sensibilización alergénica de los pacientes y ayudar en distinguir las sensibilizaciones primarias con relevancia clínica de aquellas sensibilizaciones por reactivad cruzada irrelevantes (6).

BIBLIOGRAFÍA:

1. Withers W. The acacia tree, Robinia pseudoacacia: Its growth, qualities, and uses with observations on planting, maturing and pruning. London: Shalders 1842 p 4.

2. López G. Guía de los árboles y arbustos de la Península Ibérica y Baleares. Madrid: Ediciones Mundiprensa 2002. p. 331-332, 418-420.

3. Lewis WH, Vinay P. North American pollinosis due to insect-pollinated plants. Ann Allergy 1979; 42:309-18.

4. Cosmes Martín PM, Moreno Ancillo A, Domínguez Noche C, et al. Sensitization to Castanea sativa pollen and pollinosis in northern Extremadura (Spain). Allergol Immunopathol 2005; 33:145-50.

5. Loureiro G, Rabaca M, Blanco B, et al. Aeroallergens sensitization in an allergic paediatric population of Cova da Beira, Portugal. Allergol Immunopathol 2005; 33:192-8.

6. Valenta R, Lidholm J, Niederberger V, Hayek B, Kraft D, Gronlund H. The recombinant allergen-based concept of component-resolved diagnosis and immunotherapy (CRD and CRIT). Clin Exp Allergy 1999; 29:896-904.